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基因的PCR擴(kuò)增和DNA熔解分析
點(diǎn)擊次數(shù):3195 更新時(shí)間:2017-04-06

      TaqMan探針作為阻斷劑參與突變基因的PCR擴(kuò)增和DNA熔解分析

TaqMan探針的非對(duì)稱(chēng)PCR以及DNA熔解分析被應(yīng)用于突變檢測(cè),可有效用于臨床診斷。該方法簡(jiǎn)單、成本低,在一個(gè)封閉的離心管中進(jìn)行,可zui大限度的減少反應(yīng)時(shí)間,減輕工作量,以及避免樣品間的交叉污染。盡管DNA熔解分析比DNA常規(guī)測(cè)序更加靈敏(兩者的突變檢測(cè)閾值分別為5%15%20%),但相比與那些工作量大且昂貴的生物技術(shù),如焦磷酸測(cè)序和微滴型數(shù)字PCR而言,其靈敏度相差甚遠(yuǎn)。Irina V. Botezatu等科學(xué)家證明,在一些特殊的非對(duì)稱(chēng)PCR情況下,TaqMan探針可作為阻斷劑,能夠優(yōu)先阻斷野生型等位基因的擴(kuò)增,從而導(dǎo)致突變型等位基因的大量擴(kuò)增。因此,使得BRAFNRAS突變基因的檢測(cè)靈敏度增加了10倍。

原文:

Irina V. Botezatu, Irina O. Panchuk, Anna M. Stroganova, et al. TaqMan probes as blocking agents for enriched PCR amplification and DNA melting analysis of mutant genes. BioTechniques 62:62-68 (February 2017).

 

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